文章摘要:本研究组建了基于高分辨熔解曲线分析的大肠杆菌O157:H7实时荧光定量PCR快速检测试剂盒，对试剂盒的灵敏度、特异性、抗干扰能力和检测人工污染样品的情况进行了评估，并在组建试剂盒的基础上，利用叠氮溴化丙锭（PMAxx）对活/死细胞的选择性，构建了大肠杆菌O157:H7活菌定量检测技术。结果显示，试剂盒特异性强，仅大肠杆菌O157:H7血清型有阳性扩增；最低检测限为84CFU/m L；在四种常见食源性致病菌干扰下能准确检测出大肠杆菌O157:H7；在人工污染食品样品的实际检测中，可检测到初始污染量为7.97×100 CFU/m L的样品；通过单因素变化试验对PMAxx处理的各项参数进行优化，确立了曝光时间11 min、暗孵育时间20min、PMAxx浓度30μmol/L的最优反应体系，并与本研究组建的实时荧光定量PCR试剂盒相结合，建立了在3.4×10⁷～3.4×10² CFU/m L浓度范围内Ct值与菌液浓度线性关系良好的大肠杆菌O157:H7活菌定量检测方法，为食源性致病菌快速定量检测提供技术支持。

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